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@wikiにはいくつかの便利なプラグインがあります。 アーカイブ インスタグラム コメント ニュース 人気商品一覧 動画(Youtube) 編集履歴 関連ブログ これ以外のプラグインについては@wikiガイドをご覧ください = http //atwiki.jp/guide/
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Top Page 作成日 2007/09/13 H.Naito 更新日 2007/11/20 H.Naito 技術情報開発言語 スクリプト Unix / Linux Windows 全般 Office DB 統合開発環境 業務知識金融工学 会計学 雑記バージョン コマンドプロンプトをコンテキストメニューに追加したい 技術情報 開発言語 VB6.0 VC6.0++ VB.NET VC++.NET Java C/C++ PL/SQL スクリプト Ruby Perl VBS_WSH Windows Power Shell Shell スクリプト Unix / Linux Unix 全般 Linux 全般 vi_コマンド Shell スクリプト コマンド Windows 全般 VBA VBS_WSH Windows Power Shell Windows Command WinAPI レジストリ関連 Office OpenOffice MS Office Word Excel PowerPoint Access DB Oracle PL/SQL MySQL SQL Server PostgrSQL Sybase Access 統合開発環境 VisualStudio Eclipse 業務知識 金融工学 会計学 雑記 バージョン version 1.0.2 とあった場合、 1 ... Major version 0 ... Minor Version 2 ... Build Revision コマンドプロンプトをコンテキストメニューに追加したい 以下のレジストリファイルを作って、インストールする。 Windows Registry Editor Version 5.00 [HKEY_CLASSES_ROOT\Directory\shell\コマンドプロンプト( C)] [HKEY_CLASSES_ROOT\Directory\shell\コマンドプロンプト( C)\command] @="cmd.exe \\\"%1\\\""
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2011/02/10 13 13/ edit this_page tags () Windows7(32bit)へのandLinuxインストールログ 情報源 andLinuxのインストール方法! Think IT andLinuxのインストール josch (よっしゅ) のホームページ andLinux 日本語の設定 josch (よっしゅ) のホームページ andLinux 起動の高速化 josch (よっしゅ) のホームページ page top/ edit this page andLinux KDEのインストール記録 andLinux Console (NT) をWindowsの「スタートメニュー」→「andLinux」から起動する。 一般ユーザーでログインする。 root のパスワードを変更した。 タイムゾーンを変更した。 su mv /etc/profile /etc/profile.org cp /etc/profile.org /etc/profile /etc/profileの変更 source /etc/profile xlogo root でログインしなおし。 shutdown -r now 一般ユーザーでログイン su wget -q http //www.ubuntulinux.jp/ubuntu-ja-archive-keyring.gpg -O- | apt-key add - wget http //www.ubuntulinux.jp/sources.list.d/gutsy.list -O /etc/apt/sources.list.d/ubuntu-ja.list apt-get update apt-get upgrade (時間がかかる) * andLinuxのインストール記録 andLinux.orgよりminimal / XFCE versionをダウンロードした。 ダブルクリックでインストール開始。 Kernal - (stable, recommended) Memory Size - 768MB Xming - yes Sound - no Startup Type + Panel - run andLinux automatically as NT service + use Windows shortcutsandLinuxをコマンドプロンプトから手動で起動、かつXFCE Panelを使ってアプリケーションを呼び出す andLinuxをコマンドプロンプトから手動で起動、かつショートカットを使ってアプリケーションを呼び出す(WordやExcelのようにemacsなどを呼び出す) andLinuxをアイコンから手動で起動、かつXFCE Panelを使ってアプリケーションを呼び出す andLinuxをアイコンから手動で起動、かつショートカットを使ってアプリケーションを呼び出す(WordやExcelのようにemacsなどを呼び出す) andLinuxを自動で起動、かつショートカットを使ってアプリケーションを呼び出す(WordやExcelのようにemacsなどを呼び出す) andLinux Login - Windows File Access - using CoFS File Access Using CoFS Which additional tasks should be performed?CoLinux Console (FLTK) CoLinux Console (NT) restart windows page top/ edit this page キーボードの設定 % sudo dpkg-reconfigure console-data Select keymap from arch list qwerty Japanese Standard page top/ edit this page rootのパスワード設定 terminal [user@andLinux ~]$ sudo /bin/bash [sudo] password for user [root@andLinux ~]# passwd root Enter new UNIX password Retype new UNIX password passwd password updated successfully [root@andLinux ~]# exit eixt [user@andLinux ~]$ su Password [root@andLinux user]# exit exit [user@andLinux ~]$ page top/ edit this page パッケージのアップデート (以下の日本語化のほうをやる) [root@andLinux ~]# apt-get update [root@andLInux ~]# apt-get upgrade page top/ edit this page 仮想ディスクを2G(デフォルト)から増やす 「スタート」?>「プログラム」?> 「andLinux」?>「stop andLinux」 C \Program Files\andLinux\ImageResizeTool.zipを適当なディレクトリにコピーし展開する。 cd "Program Files\andLinux\Drives" C \tmp\resize2fs.exe -p -f base.vdi 20G (20Gにする) page top/ edit this page タイムゾーンの変更 # [sudo] dpkg-reconfigure tzdata 「Asia」を選択する 「Tokyo」を選択する dateコマンドでJST(Japan Standard Time)になる。 page top/ edit this page # date Tue Oct 28 16 40 44 JST 2008 page top/ edit this page X (Xming) の設定 $ loadkeys ja106 ## 日本語キーボードを使っている方は実行する $ cp -ip /etc/profile{,.`date +%Y%m%d`} $ vi /etc/profile IPアドレスの、192.168.11.1を、10.0.2.2に変更する [変更前] export DISPLAY=192.168.11.1 0.0 export ESPEAKER=192.168.11.1 16001 export PULSE_SERVER=192.168.11.1 [変更後] export DISPLAY=10.0.2.2 0.0 export ESPEAKER=10.0.2.2 16001 export PULSE_SERVER=10.0.2.2 $ source /etc/profile $ xlogo page top/ edit this page 日本語が使えるようにする アップデートを実行する前に source.list に日本のレポジトリを加えておきます。 wget -q http //www.ubuntulinux.jp/ubuntu-ja-archive-keyring.gpg -O- | apt-key add - wget http //www.ubuntulinux.jp/sources.list.d/gutsy.list -O /etc/apt/sources.list.d/ubuntu-ja.list page top/ edit this page アップデートの実行 apt-get update apt-get upgrade page top/ edit this page 日本語のパッケージとフォントをインストール apt-get install language-pack-ja ttf-vlgothic page top/ edit this page さざなみフォントや東風フォントのインストール(なくてもよい) apt-get install ttf-kochi-gothic ttf-kochi-mincho ttf-sazanami-gothic ttf-sazanami-mincho page top/ edit this page ロケールの設定 dpkg-reconfigure locales update-locale LANG=ja_JP.UTF-8 page top/ edit this page andLinuxを再起動 shutdown -r now page top/ edit this page 2011/02/10 13 13/ edit this_page tags ()
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■1-16-95 Mexico City show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■A Dos Metros Del Mito, 2-14-95 Buenos Aires show. (2CDR) ■2-16-95 Buenos Aires show. ■3-14-95 Tokyo show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■3-16-95 Tokyo show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■3-22-95 Fukuoka show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■3-22-95 Fukuoka show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■3-23-95 Fukuoka show. ■4-1-95 Sydney show. (untitled 1CDR transferred from audio tape) ■Even Better than Melbourne, 4-1-95 Sydney show. (2CDR) ■4-2-95 Sydney show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■4-8-95 Perth show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■4-12-95 Brisbane show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■4-16-95 Auckland show. ■4-17-95 Auckland show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■6-6-95 Helsinki show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■Anyone Here, From Tampere?, 6-6-95 Helsinki show. (2CDR) ■All Down the Line in Oslo, 6-9-95 Oslo show. (2CDR) ■6-11-95 Copenhagen show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■Contains the complete show from 6-13-95 Nijmegen in average audience quality on CDR from an alternate recording source. Rare version. (untitled 2CDR) ■6-14-95 Nijmegen show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■A Rainy Night in Holland, 6-18-95 Landgraaf show. (2CDR) ■6-24-95 Werchter show. ■6-25-95 Werchter show. ■Slipping Away Sheffield, 7-9-95 Sheffield show. (2CDR) ■The Voodoo Connection, 7-11-95 London show. (2CDR) ■Contains the complete show from 7-15-95 in much improved audience quality on CDR. Major upgrade here guys. (untitled 2CDR) ■The Last Wembley 95 Show, 7-16-95 London show. (2CDR) ■Welcome to Brixton Academy (Mickboy Remaster), 7-19-95 London show. (2CDR) ■7-22-95 Gijon show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■7-29-95 Basel show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■First Night in Basel, 7-29-95 Basel show. (2CDR) ■7-30-95 Basel show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■Tumbling Dice in Basel, 7-30-95 Basel show. (2CDR) ■8-1-95 Zeltweg show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■Voodoo Lounge in Zeltweg, 8-1-95 Zeltweg show. (2CDR) ■Direct from DAT master that is newly circulating. Contains the complete show from 8-3-95 Munich in excellent audience quality on CDR. One of the best audience recordings I have ever heard. (untitled 2CDR Silkcut DAT master) ■8-5-95 Prague show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■Step in to the East, 8-5-95 Prague show. (2CDR) ■8-8-95 Budapest show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■8-12-95 Schüttorf show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■For the Very First Time, 8-15-95 Leipzig show. (2CDR) ■8-17-95 Berlin show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■Direct from DAT master that is newly circulating. Contains the complete show from Berlin 8-17-95 in excellent audience quality on CDR. One of the best audience recordings I have ever heard. (untitled 2CDR G. the Cock DAT master) ■8-25-95 Wolfsburg show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■Direct from DAT master that is newly circulating. Contains the complete show from 8-25-95 Wolfsburg in excellent audience quality on CDR. One of the best audience recordings I have ever heard. (untitled 2CDR G. the Cock DAT master) ■8-29-95 Rotterdam show. (untitled 2CDR transferred from audio tape) ■Direct from DAT master that is newly circulating. Contains the complete show from Berlin 8-29-95 in excellent audience quality on CDR. One of the best audience recordings I have ever heard. (untitled 2CDR G. the Cock DAT master) ■Voodoo Bytes (2CDR) 1994-1995 ■When Voodoo Comes to European (2CDR) 1995 ■The Best of the Voodoo Lounge Volume One (2CDR) 1994-1995 ■The Best of the Voodoo Lounge Volume Two (2CDR) 1994-1995 BACK / NEXT
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ニュース @wikiのwikiモードでは #news(興味のある単語) と入力することで、あるキーワードに関連するニュース一覧を表示することができます 詳しくはこちらをご覧ください。 =>http //atwiki.jp/guide/17_174_ja.html たとえば、#news(wiki)と入力すると以下のように表示されます。 ドラゴンクエストけしケシ攻略Wiki - Gamerch(ゲーマチ) マニュアル作成に便利な「画像編集」機能を提供開始! - ナレッジ共有・社内wikiツール「NotePM」 - 川崎経済新聞 【グランサガ】リセマラ当たりランキング - グランサガ攻略wiki - Gamerch(ゲーマチ) 【ウマ娘】隠しイベントの発生条件と効果まとめ - Gamerch(ゲーマチ) 「Wiki」創設者のPC 競売に - auone.jp 篠原悠希×田中芳樹が明かす「歴史ファンタジー小説ならではの悩み」(現代ビジネス) - Yahoo!ニュース - Yahoo!ニュース 【Apex Legends】ヴァルキリーの能力と評価【エーペックス】 - Gamerch(ゲーマチ) モンハンライズ攻略Wiki|MHRise - AppMedia(アップメディア) 【ウインドボーイズ】リセマラ当たりランキング(最新版) - ウインドボーイズ攻略Wiki - Gamerch(ゲーマチ) ポケモンBDSP(ダイパリメイク)攻略wiki - AppMedia(アップメディア) 【テイルズオブルミナリア】リセマラ当たりランキング - TOルミナリア攻略Wiki - Gamerch(ゲーマチ) SlackからWikiへ!シームレスな文章作成・共有が可能な「GROWIBot」リリース - アットプレス(プレスリリース) 【ウマ娘】チャンピオンズミーティングの攻略まとめ - Gamerch(ゲーマチ) 【ウマ娘】ナリタブライアンの育成論|URAシナリオ - Gamerch(ゲーマチ) 【シャーマンキング】リセマラ当たりランキング【ふんばりクロニクル】 - ふんクロ攻略Wiki - Gamerch(ゲーマチ) サモンズボード攻略wiki - GameWith 【まおりゅう】最強パーティー編成とおすすめキャラ【転スラアプリ】 - Gamerch(ゲーマチ) 【スタオケ】カード一覧【金色のコルダスターライトオーケストラ】 - Gamerch(ゲーマチ) 【スマブラSP】ソラのコンボと評価【スマブラスペシャル】 - Gamerch(ゲーマチ) 【ブレフロレゾナ】リセマラ当たりランキング【ブレイブフロンティアレゾナ】 - ブレフロR攻略Wiki - Gamerch(ゲーマチ) 【ポケモンユナイト】サーナイトの評価と性能詳細【UNITE】 - Gamerch(ゲーマチ) 仲村トオル、共演者は事前に“Wiki調べ”(オリコン) - Yahoo!ニュース - Yahoo!ニュース 【ENDER LILIES】攻略チャートと全体マップ【エンダーリリィズ】 - Gamerch(ゲーマチ) 【ウマ娘】あんしん笹針師の選択肢はどれを選ぶべき? 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DURATION
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01July/2012 最近の、DAG研究の動向と方向性 基本的に、あまり進んでいない。2006年のうちらの論文および2010年のNewton ACの論文によるそれぞれの膜においてのシグナルのcompartmentalizeが、cell biologyのDAGに関する新しい発見である。これは、imaging技術の発展なしにしてはわからなかったことである。 24/Mar/2011 I found this paper with the search with the word, SMase and diacylglycerol. Methylmercury-induced toxicity is mediated by enhanced intracellular calcium through activation of phosphatidylcholine-specific phospholipase C D609 06/Dec/2010 These are the papers related to that DAG is cruical for membrane funsion. 1. Biochemistry. 1989 May 2;28(9) 3703-9. Physiological levels of diacylglycerols in phospholipid membranes induce membrane fusion and stabilize inverted phases. Siegel DP, Banschbach J, Alford D, Ellens H, Lis LJ, Quinn PJ, Yeagle PL, Bentz J. Procter and Gamble Company, Miami Valley Laboratories, Cincinnati, Ohio 45239-8707. 2.J Cell Biol. 2004 Dec 20;167(6) 1087-98. Interdependent assembly of specific regulatory lipids and membrane fusion proteins into the vertex ring domain of docked vacuoles. Fratti RA, Jun Y, Merz AJ, Margolis N, Wickner W. Department of Biochemistry, Dartmouth Medical School, Hanover, NH 03755, USA. In this paper, they say DAG has inhibitory effect on vesicle fusion. 3.J Biol Chem. 2004 Dec 17;279(51) 53186-95. Epub 2004 Oct 12. Diacylglycerol and its formation by phospholipase C regulate Rab- and SNARE-dependent yeast vacuole fusion. Jun Y, Fratti RA, Wickner W. Department of Biochemistry, Dartmouth Medical School, Hanover, NH 03755-3844, USA. Paper In this paper, they say that DAG is masked by C1B domain, vacuola fusion is inhibited. 4. Biochem Biophys Res Commun. 2010 Apr 9;394(3) 733-6. Epub 2010 Mar 15. A novel complete reconstitution system for membrane integration of the simplest membrane protein. Nishiyama K, Maeda M, Abe M, Kanamori T, Shimamoto K, Kusumoto S, Ueda T, Tokuda H. Institute of Molecular and Cellular Biosciences, The University of Tokyo, 1-1-1 Yayoi, Bunkyo-ku, Tokyo 113-0032, Japan. nishiyam@iwate-u.ac.jp paper 5.Biochim Biophys Acta. 2010 Jan;1798(1) 59-64. Epub 2009 Nov 3. End-products diacylglycerol and ceramide modulate membrane fusion induced by a phospholipase C/sphingomyelinase from Pseudomonas aeruginosa. Ibarguren M, Bomans PH, Frederik PM, Stonehouse M, Vasil AI, Vasil ML, Alonso A, Goñi FM. Unidad de Biofísica (Centro Mixto CSIS-UPV/EHU), y Departamento de Bioquímica, Universidad del País Vasco, Apto. 644, 48080 Bilbao, Spain. Paper 6.Biophys J. 2009 May 6;96(9) 3638-47. A comparison of the membrane binding properties of C1B domains of PKCgamma, PKCdelta, and PKCepsilon. Sánchez-Bautista S, Corbalán-García S, Pérez-Lara A, Gómez-Fernández JC. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular A, Facultad de Veterinaria, Universidad de Murcia, E-30080-Murcia, Spain. Paper 7.Biochim Biophys Acta. 2009 Mar;1788(3) 701-7. Epub 2008 Dec 3. Calcium inhibits diacylglycerol uptake by serum albumin. Ahyayauch H, Arana G, Sot J, Alonso A, Goñi FM. Unidad de Biofísica (Centro Mixto CSIC-UPV/EHU), and Departamento de Bioquímica, Universidad del País Vasco, Aptdo. 644, 48080 Bilbao, Spain. Paper 8. Progress in Lipid Research Volume 38, Issue 1, January 1999, Pages 1-48 Structure and functional properties of diacylglycerols in membranes Félix M. Goñi* and Alicia Alonso Grupo Biomembranas (Unidad Asociada al CSIC), Departamento de Bioquímica, Universidad del País Vasco, Aptdo. 644, 48080 Bilbao, Spain Paper 20Dec2010 About the experiment for biological significance of outer DAG. Previously I did experiment about the difference in cell growth between the cells with or without DAG probe. At the time, it seems that the flowting cells exist more in the cells incubated with DAG probe. This means that cell growth is suppressed with DAG probe. But MDCK cells s growth is very fast. I am gonna reduce the % of serum and make growth rate slow down. 14Dec2010 I need to finish this paper now around. But there are several things I have to do... 1. see if DAG comes out to the outer plasma membrane in response to ATP. 2. biological significance of outer DAG. The day after tomorrow, I gonna do the following expreiments. 1. Time course of outer DAG production in response to ATP in MDCK cells. 2. inhibitor of R59949 and U73122 at the time point of 10 min 3. mGluR expressed MDCK cells 1. SMnaseBcPLC, SMnase, ATP, ctrl. 1. ctrl(no D609),ctrl(D609), 1min(D609,ATP) 4min, 7min,10min. 2. ctrl(no D609), ctrl(D609), ctrl(D609ATP)D609ATPU73122, D609ATPR59949, biological significance 1. cell growth 2. incorporation of LDL or something. 24/Nov/3010 I am gonna do the following experiments. 1) 1. Incubate with 1 microM ATP and 10 U SMase and 12.5 unit/ml Bc-PLC for 4 min and 10 min and 10 min respectively. Do nothing about ctrl. 2. Fix cells with 3 % PFA for 15 min. 3. Add NH4Cl for 5 min. 2) Preincubation with D609 for 5 hour. 1. Preincubation of the cells with 15micro/L U73122 for 10 min shortly before starting experiments. 2. ATP stimulation and after 10 min, incubate with EFYP-C1AB for 2 min. 3. Fix cells with 3 % PFA for 15 min. 4. Add NH4Cl for 5 min. 22/Nov/2010 Transfection of DsRED2 and EYFP-C1AB into MDCK cells. What I want to do is that examination of DAG in stady state in ctrl SMase, Bc-PLC and ATP treated MDCK cell. 28/Oct/2010 I am gonna do the experiment for the paper. 1. incubation with D609 for 0, 1, 3, 6 and 12 hrs. 2. ATP stimulation after incubation with D609 for 6 hrs. 3. the effect of SMase, ATP and BcPLC on the inner DAG. 4. the comparison between Bc-PLC and ctrl. 12 33 12 hour incubation finish 17 06 6 hour incubation finish 12 12 1 hour incubation finish 14 12 3 hour incubation finish. 15/Oct/2010 The things I am gonna do from now is as follows. 1. At first, it is very weird that DAG flip should occured in stady state upon addition of SMase or incubation with ISP1. So,I am gonna observe DAG in inner leaflet of plasma membrane. RFP and YFP-C1AB are expressed in MDCK cells. Fix this cell. If there are some making a difference in fluorescence between RFP and YFP, YFP-C1AB can detect inner DAG. After identifing this, I am gonna do SMase addition to MDCK cells. I gonna compare the fluorescence pattern with or without SMase. 14/Oct/2010 Today I am gonna do the experiment of staining of lymphocyte with DAG probe. The way to do is something like that. MDCK, SMS-+ and Jurkat cells. (Actually I picked up 5×105 lympho cells 50microl) I want to difference in staing between MDCK and other lympho cells. 1. trypsinize 2. rip off the cells. 3. spin down 4. replace medium with HBSS. 5. incubate with DG probe for 2 min 6. fixed with 3%PFA And then, I want to see the staining pattern of Jurkat cells which have aggrigation. 1. pich up several Jurkat cells on the glass base dish. 2. replace the medium with HBSS carefully in the glass base dish. 3. 2 min incubation with DG probe 4. wash with HBSS 3 times carefully 5. fixed with 3% PFA. 07/Oct/2010 今日のDG I examined the effect of D609 on DAG on the outer leaflet of plasma membrane several days ago. Previously I thought that DAG is gonna dissapear after 6hour. However I found out that DAG dissapear more quickly within 3 hour. Basically within 1 hour, almost of DAG dissapears.So I am gonna do the following experiment next. 1. Incubate with D609 for 3 hour. At this time, I believe that internalization of recepters does not occur. So I can examine DAG flop that is drived from DAG producing in response to ATP stimulation. 2. 100microM ATP stimulation and stain the outer leaflet of DAG at 0,2,4,7,10 min. 17/Sep/2010 I did following experiments. MDCK cells were incubated with 50microg/ml D609 for 6 hour. ripped off the cells with trypsine. spread MDCK cells 24 well dish with D609. After 1 hrs, wash out the flouting cells 3 times, fixed and counted the number of cells. In control cells without D609, cells attached the bottom of dish well. However in the presence of D609, cells hardly attached the dish. 07/Sep/2010 The experiments below have been very much done. So what is the next step? The paper s theme is something involved in DAG flip-flop. So it is better focusing on DAG flip-flop. What I gonna do is as follow. 1. I am gonna check that there is no difference in cytosolic DAG production in response to ATP between with or without D609. I afraid of Receptors internalization during incubation with D609 as previously shown in some papers. If I can, I want to fix these cells because I can count cell numbers easily. 25/Aug/2010 MDCK was incubated with some drug as follows. 1. 10% LPDS 24 hrs 2. ISP-1 50 nM 24 hrs 3. FB1 40 microM 24 hrs 4. D609 50 mircog/ml 24 hrs 5. U73122 500 nM 24 hrs. 6. D609 50 microg/ml 24 hrs and U73122 500 nM 24 hrs. 7. D609 50 microg/ml 6 hrs 8. ctrl 19/Aug/2010 MDCK cells were incubated with 200 microM D609 for 12hour. But cells died perfectly. So I can not use long incubation with 200 microM D609. I am gonna try 6hour. 18/Aug/2010 The results of yesterday experiment. In fact, ISP-1 treated cells give annexin V fluorescence a little bit without Bc-PLC. After incubation with 1.25units/ml Bc-PLC, in the case of 200 nM ISP-1, fluoresecence of annexin V increases little by little. Same situation gonna happen in the case of 50 nM ISP-1. But labelling with annexin V is very weaker than 200 nM. This is the level I can ignore. So I put 50nM IPS-1 treated cells in my paper. 17/Aug/2010 Today I gonna do the following experiments. 13/Aut/2010, I did 12.5 unit/ml BcPLC application experiment. I want to confirm that ISP-1 treated cells do not have cell damages during incubation with 12.5 unit/ml Bc-PLC using anexin V. And I want to confirm whethere DAG produced by Bc-PLC is same between tISP-1 treated cells and normal cells. 13/Aug/2010 I did several important expriments. 1. whether ZS2, ZS2/SMS1 and ZS2/SMS2 have DAG on the outer leaflet of PM. Answer Every cells was stained with DAG probe at the same level. This shows that PC-PLC activity is different from SMS1 and SMS2. 2. whether D609 diminishes the outer DAG amount in MDCK cells. Answer at 6hour DAG diminished however 24 hour incubation recovered the DAG? What happen?? Anyhow I am gonna take reproducibility. 3. Glutamte applies MDCK cells expressing mGluR5. 20 microM glutamate was added to this MDCK cells. However there is no difference between not expressed cells and expressed cells. This data shows that DAG does not flop to the outer leaflet of the PM. 4. 1.25 unit/ml Bc-PLC was added to the MDCK cells treated with 50 and 200 nM ISP-1. Flip occured! 10/Aug/2010 Here is most important paper now for me. D609 D609-1 D609-2 In the experiment of 10/Aug/2010, we could not see difference in fluorescence between D609 24hour incubated MDCK cells and intact MDCK cell. So I am going to do this reproducibility again. And then I am gonna start ISP1 incubation again. 06/Aug/2010 I am gonna do ISP-1 treatment expeiment. I am gonna divide MDCK cells, which exposed 200nM and 50nM ISP-1 for observation and biochemistry expeiments. So I gonna prepare six 3.5mm well dishs for each. And I gonna do the experiment in which I want to see the effect of D609 on the receptor signalling. Because it is known that D609 causes the internalization of receptors from plasma membrane. So I prepare MDCK cells expressing inner DAG probe in three dishes. 03/Aug/2010 I got mGluR-RFP from Matsuura-kun. I can express this DNA whatever cells I want. I am gonna express this DNA CHO cells and MDCK cells. Today s result. I looked through the samples I prepared yesterday. Now I found out that DAG exists in static state. Based on this result, I need to plan the expriments. Basically, this expreiment follows the experiment of CHO cells. 02/Aug/2010 I am gonna do the experiment as follows. 1. no probe, probe only, ATP, ATP+R59949, ATP+U73122, PC-PLC. 2. MDCK cell growth with or without DAG probe. 01/Aug/2010 I am doing the experiments in which 10 microM R59949 incubation is done upon 100 microM ATP addition. I expect that more DAG comes to outer leaflet of PM than without R59949. 10 min R59949 incubation and then ATP stimulation containing R59949. 2 min incubation with DAG probe.
https://w.atwiki.jp/kojiro/pages/272.html
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